Cos'è l'RNA dell'epatite C?

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Lo studio dell'RNA del virus dell'epatite C è la procedura più importante, che consente di impostare la durata e i metodi di trattamento dei pazienti con grande precisione. La diagnosi della malattia consiste in diversi esami del sangue, come:

  • marcatori di epatite C (anti-HCV);
  • determinazione dell'RNA del virus dell'epatite C (HCV RNA).

Il primo studio è fatto al primo sospetto di epatite. La seconda opzione è la più significativa nel trattamento dell'HCV RNA, quindi consideratela in modo più dettagliato.

Cos'è l'epatite C virale?

L'epatite C virale, o HCV, è una malattia infettiva che colpisce il fegato. L'infezione con il virus avviene attraverso il sangue. Puoi infettarti eseguendo una trasfusione di sangue, quando le regole per la sterilizzazione degli strumenti medici non vengono seguite. Meno spesso ci sono casi in cui la malattia è ottenuta sessualmente o da una madre incinta al feto. L'epatite C può essere di 2 tipi.

L'epatite C cronica è la più pericolosa. È una forma di malattia che può durare per tutta la vita. Porta a gravi problemi nel funzionamento del fegato, come la cirrosi o il cancro. Nel 70-90% delle persone infette, la malattia diventa cronica.

Il pericolo più importante dell'epatite C è che procede di nascosto, senza segni di icteria. Allo stesso tempo, si lamentano spesso di febbre, nausea e vomito, debolezza fisica, aumento della fatica, perdita di appetito e peso. Allo stesso tempo, sullo sfondo di un piccolo indurimento del tessuto epatico, la sua degenerazione maligna si verifica abbastanza spesso. Per questo motivo, l'epatite C viene spesso definita "bomba a orologeria" o "assassino affettuoso".

Un'altra caratteristica della malattia è il suo sviluppo molto lento, stimato in dozzine di anni.

Di norma, quelli infetti non sentono alcun sintomo e non sono consapevoli della loro vera condizione. Spesso, una malattia può essere rilevata solo contattando un medico su un altro soggetto.

A rischio includono:

  • bambini che hanno ricevuto il virus dell'epatite C dalle loro madri;
  • tossicodipendenti;
  • persone che hanno perforato parti del corpo o tatuate con strumenti non sterili;
  • ricevere sangue o organi donatori (fino al 1992, quando l'emodialisi non è stata eseguita);
  • persone infette da HIV;
  • personale medico in contatto con pazienti infetti.

Determinazione dell'epatite C RNA

L'RNA del virus dell'epatite C, chiamato anche PCR dell'epatite C, è uno studio di materiale biologico (sangue), che può essere utilizzato per determinare la presenza diretta del genomateriale stesso del virus dell'epatite nel corpo (ogni singolo virus è un singolo pezzo di RNA).

Il metodo di prova principale è la PCR o il metodo di reazione a catena della polimerasi.

Esistono due tipi di analisi del sangue per HCV RNA:

Test di qualità

Condurre un'analisi qualitativa consente di determinare se il virus è nel sangue. Tutti i pazienti in cui sono stati trovati anticorpi anti-epatite C devono superare questo test. In base ai risultati, è possibile ottenere 2 risposte: virus "presente" o "assente". Con un risultato positivo del test (rilevato), si può giudicare la riproduzione attiva di un virus che infetta le cellule sane nel fegato.

Il test effettuato su PCR di alta qualità è sintonizzato su una sensibilità specifica, da 10 a 500 UI / ml. Se il virus dell'epatite rilevato nel sangue con un contenuto specifico inferiore a 10 IU / ml, il rilevamento del virus può diventare impossibile. Nei pazienti per i quali è stata prescritta una terapia antivirale è stato osservato un contenuto virale specifico molto basso. Pertanto, è importante che la sensibilità del sistema medico sia elevata per la diagnosi e l'impostazione di un risultato qualitativo nella reazione a catena della polimerasi.

Spesso, la reazione a catena della polimerasi dell'epatite C viene effettuata immediatamente dopo aver trovato gli anticorpi corrispondenti. I test successivi, durante il passaggio della terapia antivirale, vengono eseguiti nelle settimane 4, 12 e 24. E un'altra analisi dopo la conclusione dell'HTP viene eseguita dopo 24 settimane. Quindi - una volta all'anno.

Test quantitativo

L'analisi quantitativa dell'RNA della PCR, talvolta chiamata carica virale, determina la concentrazione (contenuto specifico) del virus nel sangue. In altre parole, la carica virale è definita come una certa quantità di RNA virale, che può essere in una quantità specifica di sangue (è comune usare 1 ml, pari a 1 cm in un cubo). Le unità per i risultati del test sono unità internazionali (standard) divise per un millilitro (IU / ml). Il contenuto del virus appare a volte in modo diverso, dipende dai laboratori in cui viene condotta la ricerca. Per l'epatite C, la determinazione quantitativa a volte utilizza valori come copie / ml.

Devi capire che non esiste una dipendenza specifica nella gravità dell'epatite C sulla concentrazione di questo ceppo nel sangue.

Controllare "carica virale" consente di determinare il grado di infettività della malattia. Pertanto, il rischio di infettare un'altra persona con un virus aumenta con un aumento della concentrazione di epatite nel sangue. Inoltre, l'alto contenuto del virus riduce l'effetto del trattamento. Pertanto, una bassa carica virale è un fattore molto favorevole per il successo del trattamento.

Inoltre, il test dell'epatite C e la sua determinazione mediante PCR svolgono un ruolo importante nell'applicazione della terapia per la malattia e determinano il successo del trattamento. Sulla base dei risultati del test, è previsto un corso di riabilitazione. Ad esempio, se la concentrazione specifica del virus dell'epatite è troppo lenta, la terapia antivirale è prolungata e viceversa.

Nella medicina moderna si ritiene che il carico di oltre 800000 ME / ml sia elevato. Un carico superiore a 10.000.000 ME / ml è considerato critico. Ma gli esperti di diversi paesi non hanno ancora la stessa opinione sui limiti della carica virale.

La frequenza del test quantitativo

In generale, un'analisi quantitativa dell'epatite viene effettuata prima della terapia antivirale e 3 mesi dopo la fine delle procedure mediche per determinare la qualità della terapia eseguita.

Di conseguenza, un test quantitativo sarà considerato una valutazione quantitativa dei risultati per il campione sopra specificato. Di conseguenza, verrà emesso il verdetto "al di sotto dell'intervallo misurato" o "non rilevato nel sangue".

Il parametro di sensibilità di un test qualitativo è solitamente inferiore alla sensibilità di un'analisi quantitativa. La trascrizione "Mancante" mostra che entrambi i tipi di test non hanno trovato l'RNA del virus. Quando l'indice di test era "al di sotto dell'intervallo misurato", un'analisi di tipo quantitativo molto probabilmente non ha trovato l'RNA dell'epatite, sebbene ciò confermi la presenza di un virus con un contenuto specifico molto piccolo.

Epatite C e suoi genotipi

La genotipizzazione dell'RNA del virus dell'epatite C diagnostica la presenza di diversi tipi genetici di epatite C. Più di 10 tipi del genoma virale sono noti alla scienza, ma per la pratica medica è sufficiente individuare diversi genotipi che hanno la maggiore quota nella regione. Determinare il tipo genetico gioca un ruolo chiave nella scelta dei tempi del trattamento, che è molto necessario se si tiene conto della vasta gamma di effetti collaterali dei farmaci per l'epatite.

Metodi di trattamento dell'epatite virale C

L'unico modo efficace per curare il virus dell'epatite, di regola, è una combinazione di 2 farmaci: l'interferone alfa e la ribavirina. Individualmente, questi farmaci non sono altrettanto efficaci. La dose raccomandata di farmaci e i tempi di utilizzo devono essere prescritti solo da un medico e individualmente per ciascun paziente. Il trattamento con questi farmaci può richiedere da 6 a 12 mesi.

Oggi non sono stati inventati farmaci che garantiscano il 100% di recupero dal virus. Tuttavia, con il giusto trattamento, la guarigione dei pazienti può raggiungere fino al 90% del numero di casi.

Epatite del DNA con quantificazione della norma

Il virus dell'epatite C è in grado di moltiplicarsi nelle cellule del sangue e causare malattie linfoproliferative. Grazie alle molteplici mutazioni, la difesa immunitaria del corpo si indebolisce e compaiono genotipi e sottotipi del virus. Con la determinazione corretta e tempestiva di un particolare tipo, dipende l'efficacia della terapia antivirale. Il pericolo di infezione è che la malattia è asintomatica. Solo il 15% dei 100 può manifestare nausea e vomito, perdita di peso e febbre.

Definizione del virus dell'epatite C.

Il tasso standard di epatite C è nelle taglie da 40 a 60 nm, con la maggior parte dei lipidi, danni al fegato derivanti da un decorso acuto o cronico della malattia. L'epatite C, cioè il virus RNA della famiglia dei Togaviridae, è estremamente resistente, viene trasmessa mediante trasfusioni di sangue o l'uso di oggetti non sterili, forniture di igiene improprie, ecc. L'analisi quantitativa consente di esaminare il sangue e identificare la struttura genetica del virus infetto.

Al fine di determinare l'epatite C e i suoi genotipi, viene eseguita un'analisi quantitativa. A seconda dell'analizzatore, è possibile determinare tre livelli di incidenza del virus RNA.

I sottotipi possono produrre varie modifiche, quindi la specificità e la sensibilità dell'analizzatore devono essere al cento per cento. Oltre a rilevare la malattia in un paziente, è necessario determinare il grado della sua gravità. Alcuni laboratori non hanno tutti i dati sulla decodifica del virus RNA, esiste la possibilità di una risposta falsa positiva.

La ricerca sull'epatite C sarà più accurata quando si studiano questi indicatori:

AlAT, AsAT; Scudo alcalino; LDH.

Attirando l'attenzione sui risultati di questi indicatori e sulla condizione generale del corpo, viene visualizzato un risultato che mostra il grado di infezione, la forma e il numero di cellule epatite C nel sangue. Ciò contribuisce al processo di guarigione e all'efficacia della terapia antivirale.

Tipi di analisi per l'epatite C

Una reazione a catena multidimensionale (PCR) dà un'idea del numero di particelle di DNA nelle analisi dei pazienti effettuate e identifica correttamente l'agente infettivo.

Possono verificarsi agenti causativi di malattie infettive. Un'infezione del fegato, come l'epatite C, è curabile nei nostri tempi quando viene rilevata tempestivamente. Se si sospetta un virus, viene eseguita l'analisi PCR.

Dato che per lungo tempo i sintomi del virus possono essere mascherati, una persona potrebbe non sentire l'insorgenza della malattia. Ma con un esame approfondito nel 60-70% dei casi, l'epatite C viene rilevata, la prima analisi, in cui è ELISA, seguita dalla diagnosi PCR. L'analisi viene effettuata in determinati periodi per determinare lo stadio della malattia e prescrivere il trattamento appropriato. Per farne a meno, senza applicare tutte queste procedure, è possibile essere vaccinati contro l'epatite.

L'analisi, compresa la diagnostica PCR, fornisce un quadro della malattia, quanto è attivo il virus in diversi periodi di sviluppo.

Innanzitutto, esiste un'analisi qualitativa che conferma solo l'ipotesi sull'infezione e quindi un quantitativo, determinando il carico sul fegato. L'opzione ideale sarebbe un risultato negativo per l'epatite C nel materiale genetico del paziente.

Analisi qualitativa e quantitativa

Ci sono analisi qualitative e quantitative. L'essenza del primo è che determina la presenza di infezione nel sangue. E questo significa che il virus infetta cellule epatiche sane. Quando si trovano anticorpi contro l'epatite C in un paziente, viene immediatamente eseguito un test qualitativo. Il tasso che il risultato dovrebbe dare è "non rilevato nel sangue". Quando si determina la concentrazione di un virus, è necessario conoscere la sensibilità del sistema diagnostico, poiché le persone sottoposte a terapia antivirale possono eseguire l'analisi. Il grado di sensibilità dell'analizzatore non deve essere inferiore a 50 IU / ml.

Quando viene rilevato un virus, viene eseguita un'analisi quantitativa, in altre parole, la carica virale, che determina la concentrazione del virus nel sangue e la gravità della malattia.

L'RNA virale, che si trova in una certa quantità di sangue, è definito come la norma al ritmo di 1 ml per 1 centimetro cubico. Dopo aver quantificato la carica virale, è possibile valutare il grado di infezione dell'ambiente ancora non infetto. Non appena la concentrazione di epatite C sale nel sangue, è necessario isolare dall'ambiente.

È importante nelle prime fasi rilevare il grado di concentrazione dell'epatite, al fine di determinare il ritmo della riabilitazione. Se il tasso di epatite C è superato di oltre 800 mila IU / ml, è considerato troppo alto, con un aumento fino a un milione - critico. Se l'intervallo quantitativo è inferiore a 400 mila IU / ml, si ritiene che l'infezione di quelli intorno sarà meno probabile. Questa cifra chiarisce che l'epatite C è presente nel corpo in dosi molto piccole. L'analisi non è stata in grado di determinare il valore quantitativo delle particelle di RNA del virus, pertanto è stata ripetuta diverse volte per l'accuratezza della diagnosi.

Risultati dell'analisi quantitativa

Il compito di determinare la quantità di carica virale nel sangue di un paziente è l'identificazione del grado di infezione per gli altri.

Test dell'epatite C

consente di valutare l'efficacia della terapia antivirale, il livello di infettività e il numero di tessuti infetti.

È importante prevenire la progressione della malattia, adottare misure preventive nel tempo, prescrivere il trattamento corretto basato sulla diagnostica della PCR. Se, in base ai risultati, il livello di carica virale è inferiore a 400 mila IU / ml, la concentrazione potrebbe essere minima, il che indica un possibile recupero completo. La norma per un risultato positivo è l'assenza di infezione.

I risultati dell'analisi PCR:

Una risposta positiva significa che c'è un'infezione nel materiale biologico. L'analisi consente di determinare il numero esatto di cellule infette. La risposta negativa indica l'assenza di infezione, che viene attentamente ricercata nel corpo.

Il metodo di determinazione quantitativa dell'epatite C è accurato e informativo, eseguito su apparecchiature ad alta sensibilità. Decifrare i risultati dell'analisi consente di scoprire se l'infezione e le sue caratteristiche specifiche, per vedere il più piccolo numero di cellule infette su analizzatori altamente sensibili.

I risultati falsi positivi o opposti sono raramente dati dall'analisi, più spesso ciò avviene negli studi di immunodosaggio.

Recentemente, la ricerca di "analisi quantitativa dell'epatite con decodifica" sta comparendo sempre più nei motori di ricerca di risorse Internet.

In effetti, il virus dell'epatite è diffuso e pericoloso, la malattia colpisce il fegato. Il suo nome deriva dal lat. l'epatite è un'infiammazione del fegato. L'infezione avviene attraverso il sangue o sessualmente, più spesso gli adulti hanno un'età compresa tra i 25 ei 50 anni.

Ci sono diversi tipi di questa malattia. L'epatite C non ha una gravità brillante, ma nel 40-70% dei casi diventa cronica, può causare cirrosi e cancro. Questa malattia richiede una diagnosi accurata e l'interpretazione dei dati, per i quali sono state sviluppate tecniche. Uno di questi è l'analisi dell'RNA dell'HCV RNA mediante PCR.

Analisi dell'RNA dell'HCV RNA mediante PCR

L'RNA (acido ribonucleico) è un tipo di macromolecola, uno dei componenti di una cellula vivente. L'RNA è responsabile della codifica delle informazioni genetiche. Il virus dell'epatite C contiene una molecola di RNA e tende a mutare. 6 dei suoi sottotipi sono noti, così come molti sottotipi.

La malattia nella sua fase cronica porta alla fibrosi del fegato - i tessuti connettivi crescono, la struttura dell'organo viene gradualmente interrotta. La fibrosi è suscettibile di trattamento tempestivo, dal momento che il fegato non ha ancora subito processi distruttivi. A differenza della cirrosi, una grave malattia epatica irreversibile in cui la fibrosi può svilupparsi senza prendere le misure necessarie nel tempo.

Una persona con sospetto di avere un virus dell'epatite B è determinata da anticorpi ad esso. Se non lo sono, la malattia è esclusa, se disponibili, ricorrono al metodo PCR (polymerase chain reaction). In biologia molecolare, è sperimentale, ma occupa un posto di primo piano tra i metodi di diagnosi delle malattie infettive. Con esso, è possibile aumentare significativamente la concentrazione di frammenti molecolari nel campione. 10 giorni dopo l'infezione, l'RNA è già possibile determinare nel sangue.

Questo metodo è l'unico in grado di rilevare la malattia nelle sue fasi iniziali. In altri modi (ad esempio, con analisi del sangue biochimiche) questo non può essere fatto, dal momento che il fegato non è ancora colpito.

I test dell'epatite C con decodifica (PCR) sono un indicatore affidabile della presenza del virus nel sangue umano.

Il metodo è stato scoperto nel 1993 dal biochimico Kerry Mullis, per il quale ha vinto il premio Nobel. La PCR è stata un passo avanti nella medicina e nella scienza, poiché ha permesso di identificare in modo rapido e preciso le infezioni nel sangue e in altri materiali biologici umani. In altre parole, il metodo ha accelerato lo sviluppo della diagnosi delle malattie infettive.

L'analisi dell'RNA dell'HCV RNA mediante PCR è efficace per i seguenti motivi:

ha una buona sensibilità - viene rilevata anche una piccola quantità di virus nel sangue; il virus stesso è determinato, non i sottoprodotti creati da esso; Il tipo di agente patogeno è determinato.

Differenze nell'analisi quantitativa dell'RNA dell'HCV da quelle qualitative

Il metodo PCR comprende due metodi principali per studiare il materiale biologico per la ricerca del virus dell'epatite C:

Questi studi hanno compiti diversi.

Un'analisi qualitativa dell'epatite con decodifica conferma la presenza del virus dopo che gli anticorpi della malattia sono già stati trovati nel sangue. Se lo studio ha dato un risultato positivo, allora la malattia viene rilevata. In altre parole, una persona è infetta. Se si ottiene un risultato negativo, significa che la persona non è infetta o la concentrazione del virus è troppo piccola. Questa concentrazione non viene rilevata in questo modo.

Inoltre, il quadro clinico della malattia si basa sui marcatori dell'epatite C e sull'interpretazione dell'analisi. I marker principali sono le immunoglobuline (anticorpi) M e G. La loro presenza nel sangue del paziente indica un processo non caratteristico per un organismo sano. Sulla base della presenza di questi anticorpi, il paziente, di regola, stabilisce la diagnosi primaria.

L'analisi quantitativa è prescritta per il rilevamento primario di anticorpi e, se necessario, trattamento.

Inoltre, l'analisi quantitativa dell'epatite C è prescritta per l'individuazione dell'epatite mista (infezione con diversi virus contemporaneamente).

L'analisi quantitativa con decodifica viene effettuata al fine di:

chiarimento della diagnosi finale; costruire previsioni sul decorso della malattia e sul suo trattamento: estensione, riduzione del trattamento o cambio di tattica; monitoraggio della terapia.

L'indicatore internazionale di UI / ml significa che viene esaminata la quantità di RNA in 1 ml di sangue. Un alto indicatore quantitativo indica una maggiore probabilità di infettare un'altra persona.

Affinché i risultati siano veri, devi seguire il regime stabilito prima di donare il sangue:

vieni in laboratorio a stomaco vuoto, l'ultima volta che puoi mangiare 8 ore prima della procedura; due giorni prima dello studio sono proibiti alcol, cibi grassi e fritti; ultrasuoni, massaggi, fisioterapia prima dello studio non possono essere eseguiti; la medicazione è proibita per il giorno, se è impossibile annullare l'assunzione di determinati farmaci, questo è segnalato prima del prelievo di sangue; prima della procedura, si raccomanda di ridurre il più possibile i carichi fisici e nervosi.

L'adempimento di questi requisiti sarà la chiave per ottenere risultati corretti di un'analisi quantitativa dell'epatite C.

Interpretazione dell'analisi quantitativa

Dopo aver ottenuto gli indicatori di analisi quantitativa, è necessario decifrare i risultati dei test per l'epatite C. I risultati sono calcolati sia in unità di IU / ml sia in copie per ml. Per ottenere i risultati, convertiti in copie, utilizzare diverse tecniche.

Monitor HCV (fattore di conversione su ME - 2.7); LCX HCV RNA (fattore di conversione in ME - 3.8).

Tabella. Interpretazione dell'analisi quantitativa dell'RNA dell'HCV mediante PCR.

Analisi qualitativa per l'epatite C

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Un'analisi qualitativa della reazione a catena della polimerasi - la PCR per l'epatite C determina la presenza o l'assenza di HCV nel corpo. In condizioni di laboratorio, viene studiata la struttura dell'RNA, che includerà il virus. In caso di rilevamento del virus C, è necessario sottoporsi a un ciclo di trattamento, poiché lo stato trascurato del fegato si tradurrà in gravi conseguenze. Anche la PCR di alta qualità viene eseguita dopo il recupero per confermare l'assenza di anticorpi. Assegnato per ispezione di routine. Con una bassa concentrazione dell'agente causale nel sangue, la PCR (qualitativa) potrebbe non rilevare nulla, poiché il sistema diagnostico ha le proprie soglie di sensibilità. Nel caso della fase iniziale della malattia o della forma lieve, la PCR Ultra Diagnostics viene eseguita su apparecchiature ultrasensibili.

Cos'è il virus RNA?

Il termine RNA del virus dell'epatite C (o RNA del virus dell'epatite C) è la stessa malattia del fegato. Il virus C si lega alla cellula sana del corpo penetrando all'interno. Nel corso del tempo, si sviluppa in tutto il corpo, è necessario solo entrare nel sangue. Di conseguenza, il patogeno penetra nel fegato, si fonde con le sue cellule e lavora sodo. Le cellule epatiche (epatociti) lavorano sotto la sua influenza, subendo cambiamenti e da questo muoiono. Più a lungo il virus C è nel fegato, maggiore è il numero di cellule muoiono. Col passare del tempo, sviluppa malattie pericolose che portano a degenerazione e morte maligne.

L'infezione del fegato con questo tipo di virus potrebbe non manifestarsi esternamente. Per molti anni o decenni, una persona infetta si sente completamente in buona salute, e solo un esame casuale rivela molto spesso la patologia. Durante la donazione di sangue per l'epatite, viene esaminata una parte della catena di RNA (acido ribonucleico), che fa parte del gene umano (DNA). I risultati dei test di laboratorio non devono essere utilizzati per l'autotrattamento, perché questo è solo un indicatore. L'immagine esatta e l'ulteriore diagnosi sono meglio determinate dal medico.

Al termine: indicazioni per la ricerca

In conferma dell'HCV, l'analisi della PCR viene eseguita (reazione a catena della polimerasi). Gli studi sulla PCR aiutano a trovare il materiale patogeno nella struttura dell'RNA e prescrivono una terapia efficace. Nominato nei seguenti casi:

  • individuazione dei segni di infiammazione del fegato;
  • studi di screening per la prevenzione;
  • esame delle persone in contatto;
  • diagnosi di epatite di origine mista (determinazione dell'agente patogeno principale);
  • determinare il livello di attività riproduttiva del virus nella forma cronica;
  • cirrosi epatica;
  • determinare l'efficacia del trattamento prescritto.
Gli studi di PCR sono prescritti da un medico per determinare l'efficacia di un ciclo di trattamento per l'epatite.

Esiste un'analisi qualitativa e quantitativa della PCR. La PCR quantitativa mostra il rapporto percentuale tra RNA e portatori virali nel sangue e qualitativo indica presenza o assenza virale. Un indicatore positivo di qualità (presenza di RNA dell'epatite C) richiede anche una ricerca quantitativa. Un alto livello di concentrazione dell'agente causale dell'epatite C è associato al rischio della sua trasmissione, cioè l'infezione di altri. I conteggi bassi sono meglio curabili. La quantità di virus a RNA nel sangue non è correlata all'intensità della malattia. L'analisi della PCR viene effettuata anche nel caso della terapia con interferone al fine di prescrivere la durata e la complessità del ciclo di trattamento.

Funzionalità di analisi PCR di alta qualità per l'epatite C

Un'analisi qualitativa con l'indice di reazione a catena della polimerasi viene assegnata a tutti i pazienti che hanno anticorpi contro l'epatite C nel sangue, coloro che sono stati malati e recuperati devono ripetere il test. Si raccomanda di superare il test per l'epatite B, quindi, in caso di conclusione positiva, e per l'epatite D. Inoltre, la reazione qualitativamente analizzata deve essere eseguita in concomitanza con altri esami del sangue. Le analisi mostreranno un quadro completo della diffusione virale.

Dai risultati del test, solo un test positivo per l'epatite C sarà visibile o negativo, cioè la presenza o l'assenza di un virus. Se l'output è "rilevato", il virus è e continua ad essere attivo. La designazione "non rilevato" indica l'assenza di un virus o la sua piccola quantità. Con questo indicatore, si dovrebbe tenere presente che la sensibilità analitica dei sistemi diagnostici è diversa e che l'epatite C dell'RNA potrebbe essere ancora nel sangue, ma non manifestarsi nell'analisi.

Il metodo PCR particolarmente sensibile ultra epatite C si rivela anche in quantità esigue. Viene utilizzato uno studio di ibridazione a fluorescenza, che è molte volte superiore rispetto ai sistemi PCR standard. Il metodo è utilizzato in diversi casi:

  • sospette forme nascoste di epatite C;
  • La diagnostica della PCR non ha confermato l'agente patogeno, ma ci sono anticorpi;
  • in caso di recupero;
  • per rilevare l'infezione precoce.
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Analisi di decodifica

La decodifica PCR dell'HCV influisce sulla decisione finale quando si effettua una diagnosi, in particolare con il metodo ultrametod. Lo svantaggio principale di questo studio è la stretta aderenza alle condizioni sterili per il campione e i materiali. Una leggera deviazione a volte mostra conclusioni analitiche imprecise, complica la diagnosi e il successivo trattamento. L'analisi della PCR per la determinazione dell'RNA dell'epatite non sempre mostra con sicurezza un quadro della malattia, a volte sono consentite imprecisioni e in entrambe le direzioni.

Diagnosticare il virus dell'epatite, si consiglia di utilizzare un esame completo.

Norma degli indicatori

L'assenza di anticorpi JgM contro l'epatite C virale nei risultati dello studio è considerata la norma nell'analisi della reazione a catena della polimerasi. Allo stesso tempo, i risultati dell'analisi sierologica indicano la presenza di anticorpi al virus C e questo è anche entro il range normale. Una definizione qualitativa non mostra l'intensità della malattia, ma rivela solo l'agente eziologico dell'epatite C nell'RNA. Questa analisi viene ripetuta dopo il trattamento per confermare il recupero effettivo.

deviazioni

Se sono presenti anticorpi JgM per HCV RNA, questo indica un'infezione in via di sviluppo. La malattia procede allo stesso tempo in modo acuto o cronico, manifestandosi in diverse fasi. Se viene registrata una diminuzione del numero di anticorpi, l'analisi indicherà che i risultati del trattamento sono stati raggiunti durante il recupero. Nella diagnosi si trovano solo casi estremamente rari di falsi positivi. Si trovano nelle donne durante la gravidanza e nelle persone con altre malattie infettive.

Analisi qualitativa della PCR per l'epatite C

L'epatite è una malattia grave che ha molte cause. La base del suo sviluppo è il danno diretto o indiretto al fegato. Considerando la sua importanza per l'intero organismo, si può solo intuire quanto sia difficile la patologia. In questo articolo esamineremo più in dettaglio le caratteristiche del corso e la diagnosi di laboratorio dell'epatite C.

La causa della malattia è un agente virale che si riferisce a patogeni contenenti RNA. Ha una caratteristica distintiva: la capacità di mutare, cioè di cambiare la sua struttura. A causa di ciò, l'infezione fuoriesce dall'attacco del sistema immunitario e nella maggior parte dei casi provoca infiammazione cronica nel fegato.

Data l'esistenza di diversi sottotipi del virus, la selezione dei farmaci dovrebbe essere basata sui risultati della genotipizzazione. Nonostante un lungo studio della malattia e della struttura dell'HCV, non è stato ancora possibile sviluppare un vaccino specifico per la malattia.

Le difficoltà della diagnosi precoce si trovano nel decorso asintomatico dell'epatite, a seguito del quale una persona visita un medico nella fase della cirrosi. Al fine di rilevare la malattia nel tempo, sono richiesti regolari esami medici. Solo attraverso test di laboratorio sul sangue è possibile rilevare l'HCV e prevenire la contaminazione di altri. Il fatto è che il vettore dell'infezione può a lungo non indovinare la patologia e continuare a trasmettere il virus a persone sane.

Modi di trasmissione

Nella maggior parte dei casi, il virus si diffonde attraverso il sangue, poiché contiene la più alta concentrazione di agenti patogeni. Quindi, l'infezione viene trasmessa:

  • con emodialisi;
  • con un ago infetto;
  • nel processo di combattimento, quando la pelle è ferita e si verifica un contatto con il sangue;
  • con trasfusione di sangue (trasfusione di sangue).

La probabilità di infezione durante l'intimità è insignificante, poiché lo sperma e le perdite vaginali contengono una piccola quantità di agenti patogeni. Il rischio di infezione è significativamente aumentato in violazione dell'integrità della membrana mucosa dei genitali. Questo è osservato con il sesso aggressivo e anale.

Per quanto riguarda la modalità verticale di trasmissione, è effettuata nel processo di lavoro. Nel periodo di gestazione del feto, l'agente patogeno non può penetrare la placenta nell'embrione. Durante il parto naturale, l'agente patogeno viene trasmesso al bambino quando la pelle è ferita, quando si osserva il contatto con il sangue della madre.

Dopo la penetrazione del patogeno in un organismo sano, inizia la sintesi degli anticorpi, che sono protezione dall'infezione e appartengono alle strutture immunitarie. Si trovano nello studio iniziale di una persona che usa ELISA.

Viene eseguita una reazione a catena della polimerasi per confermare la diagnosi del paziente. È un'analisi del materiale genetico di un agente patogeno e la determinazione della carica virale.

Diagnosi di laboratorio dell'epatite C

La diagnosi di laboratorio inizia con un test immunoenzimatico. Il suo compito principale è rilevare gli anticorpi prodotti contro l'agente patogeno. La sua efficacia è quasi del 95%. Grazie a questa ricerca, è possibile identificare il vettore del virus in fase preclinica e inviarlo per ulteriori esami.

Un'analisi qualitativa del test ELISA indica la presenza o l'assenza di immunoglobuline nel sangue del paziente. Il suo risultato potrebbe essere "positivo" o "negativo". Avendo ricevuto la prima risposta, la persona viene inviata per il prossimo esame - PCR. Il suo prezzo dipende dalla qualità dei reagenti e del laboratorio. Il costo della reazione a catena della polimerasi può raggiungere i 4 mila rubli.

Funzioni PCR

Usando una reazione a catena della polimerasi, anche una piccola quantità di materiale biologico ci consente di stimare la carica virale nel sangue, cioè di calcolare la concentrazione di agenti patogeni in un millilitro di fluido.

Con l'avvento della PCR, la diagnosi di epatite è diventata molto più facile. L'analisi consente di identificare l'RNA dell'HCV, stabilire lo stadio del processo infettivo e l'infettività del vettore del virus.

Esistono diversi tipi di diagnosi genetica:

  1. Analisi qualitativa della PCR per l'epatite C - conferma la presenza o l'assenza di HCV nel sangue del soggetto:
  2. quantitativo, attraverso il quale è possibile calcolare la concentrazione di virus e stabilire lo stadio della malattia. Il risultato è dato in UI / ml o copie / ml (a seconda del laboratorio);
  3. genotipizzazione: necessaria per determinare il genotipo dell'HCV. Questo è necessario per l'esatta selezione di farmaci che saranno più efficaci in questo caso. L'analisi indica indirettamente la gravità del processo patologico nel fegato. Quindi, con il terzo genotipo dell'agente patogeno, la steatosi è più spesso osservata, la cui base è l'accumulo di grasso negli epatociti (le sue cellule). Inoltre, il tipo di virus influenza l'esito e la durata del decorso terapeutico.

Analisi qualitativa della PCR per l'epatite C

Innanzitutto, il materiale biologico viene esaminato in laboratorio per la presenza dell'HCV RNA. È importante ricordare che un'analisi qualitativa dell'epatite C ha un certo livello di sensibilità e quindi potrebbe non dare sempre la risposta giusta. In questo caso, si consiglia di ripetere la diagnostica di laboratorio utilizzando altri reagenti.

Per ottenere risultati affidabili, devono essere utilizzati sistemi di prova con una sensibilità di almeno 50 UI / ml.

Il risultato diagnostico può essere "positivo" o "negativo". Se l'agente patogeno non si trova nel sangue, lo studio è completato. Se viene rilevato un agente patogeno in un campione, viene quantificata una carica virale.

Una risposta falsamente negativa si ottiene quando il processo viene violato, ad esempio componenti attivi che sopprimono la costruzione di copie del patogeno che entrano nell'ambiente. Pertanto, non è possibile visualizzare una vera immagine del sangue, motivo per cui l'infezione di una persona non viene diagnosticata.

Un risultato falso positivo può essere ottenuto se il tubo per la raccolta di materiale biologico, così come l'ambiente per lo studio sono stati contaminati. Inoltre, tale risposta all'analisi è possibile con infezioni miste, quando il fegato è influenzato da diversi virus, ad esempio, epatite C e D.

Indicazioni per la ricerca qualitativa

Il medico può prescrivere a un paziente uno studio qualitativo sull'identificazione dell'RNA del virus dell'epatite C:

  • al ricevimento di una risposta immunologica enzimatica positiva o dubbia;
  • per la verifica della diagnosi;
  • determinare la carica virale;
  • impostare lo stadio della malattia;
  • diagnosi di infezione mista. L'epatite C spesso infetta il fegato contemporaneamente al virus "D";
  • determinazione delle tattiche terapeutiche tenendo conto del genotipo dell'agente causale;
  • valutare le dinamiche dei cambiamenti durante il trattamento con farmaci antivirali.

I vantaggi della reazione a catena della polimerasi includono:

  1. alta sensibilità della tecnica, che consente di stabilire il fatto di infezione in fase preclinica;
  2. identificazione del materiale genetico del patogeno e non anticorpi ad esso;
  3. la possibilità di stabilire un sottotipo di un agente patogeno;
  4. alta velocità di diagnostica, in quanto non richiede la semina del materiale sul mezzo nutritivo, e basta utilizzare specifici sistemi di test. Una persona riceve il risultato dopo 5 ore;
  5. versatilità. L'analisi consente di identificare qualsiasi materiale genetico (RNA, DNA). Per questo motivo, il medico può confermare l'epatite C e altri tipi di malattia (B);
  6. la capacità di rilevare l'infezione latente.

Ricerca quantitativa

Nello studio del sangue utilizzando la reazione a catena della polimerasi è possibile calcolare il numero di patogeni in un volume fisso di materiale biologico. L'indicatore è presentato in UI / ml. Attraverso l'analisi, è possibile determinare il grado di contagio del paziente, determinare lo stadio del processo infettivo e anche valutare l'efficacia della terapia farmacologica.

Sulla base della PCR, lo specialista decide quali dosi di farmaci possono bloccare la riproduzione dei patogeni. Inoltre, vengono determinati la durata del trattamento antivirale e la prognosi per la vita. È importante ricordare che i sistemi di test hanno un'alta sensibilità, quindi il metodo consente di confermare l'infezione di una persona allo stadio preclinico.

genotipizzazione

Data la capacità del patogeno di mutare, il suo genotipo è necessario per determinare la tattica del trattamento e la scelta dei farmaci antivirali. Ad esempio, il trattamento dell'epatite B HCV 1 dura 48 settimane, con una tendenza positiva osservata solo nel 60% dei casi. I genotipi 2 e 3 hanno una prognosi più favorevole. I farmaci antivirali sono prescritti per 8 mesi e la loro efficacia raggiunge l'85%.

Secondo le statistiche, nella maggior parte dei casi, HCV 1, 2 e 3 sono registrati nella Federazione Russa.

Quando si decifra un test di laboratorio, questa risposta può essere indicata - "non digitato". Ciò significa che un virus circola nel sistema circolatorio del paziente e non può essere riconosciuto dal sistema di test. Il risultato dell'analisi in questo caso indica che il patogeno non è tipico per una data area geografica.

Come ottenere risultati affidabili?

Affinché uno studio qualitativo della PCR per rilevare l'RNA dell'agente causale dell'epatite C abbia mostrato i risultati corretti, è necessario osservare i requisiti per la preparazione alla diagnostica di laboratorio:

  1. il prelievo di sangue viene effettuato a stomaco vuoto e il gap "affamato" non dovrebbe essere inferiore a 8 ore;
  2. due giorni prima dello studio, si raccomanda di smettere di bere bevande alcoliche e di abbandonare piatti piccanti, grassi e affumicati;
  3. annullare l'introduzione di farmaci che riducono la coagulazione del sangue, ad esempio l'eparina. Se questi farmaci sono prescritti per motivi di salute, è necessario informare il medico. Inoltre, lo specialista dovrebbe essere a conoscenza dell'ammissione di altri farmaci che possono influenzare il risultato della ricerca di laboratorio;
  4. Alla vigilia della raccolta di materiale biologico, le procedure fisioterapeutiche non dovrebbero essere eseguite e non dovrebbero essere sottoposte a gravi sforzi fisici.

I risultati dell'analisi possono essere influenzati non solo dalla persona che dona sangue, ma anche da altri fattori, vale a dire:

  • prelievo di sangue di scarsa qualità;
  • inosservanza delle raccomandazioni sul trasporto di materiale biologico;
  • formazione insufficiente dei lavoratori di laboratorio;
  • non conformità con la tecnica di ricerca;
  • introduzione di anticoagulanti (eparina) alla vigilia del campionamento del sangue. Questo gruppo di farmaci riduce la coagulazione, rallentando così il lavoro dei reagenti.

In diversi laboratori, la risposta diagnostica può differire leggermente, ma questi errori non influenzano il risultato finale dello studio.

Particolare attenzione è rivolta ai tipi di sistemi di test utilizzati in laboratorio. Spesso viene data preferenza ai reagenti con alta sensibilità. Questo è importante per i pazienti con bassa carica virale, poiché è difficile da rilevare.

Quante volte viene eseguito un test di laboratorio?

La reazione a catena della polimerasi primaria viene eseguita in persone che sono state rilevate dagli anticorpi immunologici contro il patogeno dell'epatite. In questo caso, viene assegnato per confermare il fatto di infezione di una persona e stabilire lo stadio della malattia. Inoltre, l'analisi consente di determinare il sottotipo di virus, che è particolarmente importante per la scelta dei farmaci.

Il prossimo periodo per i test di laboratorio obbligatori è di 3 mesi dall'inizio della terapia antivirale. La diagnostica consente di valutare l'efficacia dei farmaci, regolare la dose o sostituirli.

Oltre ai test di base, la PCR può essere eseguita anche a 4 e 24 settimane dall'inizio del trattamento. La prognosi positiva della malattia è confermata da una diminuzione della carica virale dopo tre mesi di terapia. Ad esempio, dovrebbe essere ridotto da 1 milione di IU / ml a diverse centinaia di migliaia.

Se la concentrazione di agenti patogeni nel sangue rimane allo stesso livello o aumenta leggermente, ciò indica l'inefficacia dei farmaci antivirali e richiede la loro sostituzione. Utilizzando la PCR alla fine del trattamento, è possibile confermare il recupero del paziente.

Per interpretare correttamente i risultati della diagnostica di laboratorio, è necessario consultare un epatologo o uno specialista in malattie infettive. Data l'alta frequenza di false risposte nell'ELISA, l'analisi viene utilizzata esclusivamente per lo screening primario. Per un esame più approfondito del paziente ha usato la reazione a catena della polimerasi.

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Diagnosi del virus dell'epatite C.

Il virus dell'epatite C (HCV) è un virus contenente RNA della famiglia Flaviviridae. Questa infezione è in grado di moltiplicarsi nelle cellule del sangue (monociti, neutrofili, linfociti B e macrofagi) e colpisce anche le cellule del fegato stesso - gli epatociti. A causa dell'alto livello di attività mutazionale, questo tipo di epatite è in grado di evitare l'esposizione al sistema immunitario umano.

Ci sono 11 genotipi e la massa di sottotipi di un tale virus, che differiscono nel grado di danno epatico e influenzano la durata del trattamento dell'epatite. Una tale varietà di epatite C richiede diversi metodi di terapia antivirale. Ad esempio, i genotipi dell'epatite 1 e 4 devono essere trattati per 48 settimane e per un ciclo di terapia contro i virus del 2 ° e 3 ° tipo, possono essere necessarie solo 24 settimane.

Dopo che il test rapido per l'epatite C ha dato un risultato positivo, l'analisi della PCR viene eseguita per rilevare l'RNA del virus nei campioni di sangue.

Diagnostica PCR

La reazione a catena della polimerasi (PCR) è una tecnica sperimentale per rilevare i virus. Tale analisi dell'epatite C può aumentare significativamente la concentrazione di alcuni frammenti di DNA o RNA del virus nei campioni trasferiti. Questo rende possibile riconoscerli e persino contare il numero.

Questo test dell'epatite C viene eseguito secondo la seguente procedura:

  1. Un campione di sangue (materiale genetico) che può contenere il gene dell'epatite desiderato viene inserito in una provetta. Sono presenti sostanze speciali, primer, che sono segmenti di breve lunghezza dal gene desiderato, che sono sintetizzati chimicamente. Anche DNA o RNA polimerasi vengono aggiunti a questo vaso: è in grado di costruire catene di acido nucleico completamente identiche all'originale. Una selezione di nucleotidi liberi, che sono materiali da costruzione speciali per DNA e RNA, viene aggiunta alla composizione ottenuta, e uno di essi contiene minuscole particelle di fosforo radioattivo.
  2. La miscela risultante viene inizialmente riscaldata a 95 gradi, in seguito alla quale si svolgono entrambe le eliche di DNA intrecciate nello stato normale.
  3. Per continuare l'analisi, il farmaco viene raffreddato, a quel punto i primer si attaccano alla sezione desiderata del genoma del virus dell'epatite, impedendo che il DNA si formi in una doppia elica. Quando la miscela si raffredda, la polimerasi cerca singole catene di nucleotidi. Durante l'attacco di questo enzima, scorre lungo la catena del DNA (come un blocco lungo la corda), e sulla doppia elica non è in grado di "lavorare", per questo scopo la miscela viene riscaldata.
  4. Per prolungare l'analisi, viene eseguito il riscaldamento, che di nuovo porta alla separazione delle catene nucleotidiche. Quando tali cicli di PCR vengono eseguiti nel campione, il numero dei geni di epatite desiderati aumenta in una proporzione geometrica, e i restanti materiali genetici vengono prodotti (formati) solo in un modello lineare.
  5. Per completare lo studio, la soluzione viene pulita dalle particelle nucleotidiche residue. Sono separati per elettroforesi, con la separazione per i parametri del peso molecolare delle catene del DNA. Tali test per l'epatite C mediante PCR consentono di determinare se i geni virali desiderati sono presenti nel campione o meno.

Il vantaggio di questo test è la soglia molto alta della reazione PCR. Una tale tecnica per la diagnosi, idealmente, è richiesta solo da un genoma del virus per l'intero campione.

Inoltre, questa PCR è completamente specifica. In ognuno dei geni c'è una sequenza unica di nucleotidi, che, come un'impronta digitale, non possono essere ripetuti da nessuna parte. Per questa analisi sull'epatite C, i primer vengono sintetizzati in modo tale che corrispondano assolutamente alle regioni uniche dei geni ricercati, che nessun'altra sequenza ha.

Questa tecnica consente anche di analizzare l'epatite C e determinarli, aiutando a stabilire la diagnosi finale.

Tale analisi di laboratorio fornisce informazioni più che la presenza o l'assenza di RNA del virus dell'epatite C o di un altro tipo in campioni di sangue. Determinando il parametro delle radiazioni radioattive, è possibile identificare la quantità del materiale genetico desiderato originariamente nel campione in esame. Ciò consente di determinare il parametro della cosiddetta carica virale - la concentrazione di particelle di RNA di epatite in un determinato volume.

Analisi qualitativa della PCR

Questa analisi consente di determinare la presenza del virus dell'epatite B in campioni di sangue. Dovrebbe essere eseguito per tutte le persone che hanno trovato anticorpi contro l'epatite.

Come risultato di tale ricerca, possono esserci solo due valori:

  • "Rilevato". Un risultato del test così positivo viene interpretato come segue: nel campione analizzato sono stati trovati frammenti di materiale biologico dell'RNA del virus dell'epatite. Ne consegue che c'era il fatto che il paziente era infetto da questo virus. Ciò potrebbe indicare che l'epatite patogena si moltiplica nel corpo e infetta nuove cellule, distruggendo il fegato.
  • "Non rilevato." Questo risultato dice che in un campione che è stato analizzato in questo laboratorio non sono stati rilevati frammenti di RNA specifici per il virus dell'epatite C. Esiste anche la possibilità che la concentrazione dell'RNA del virus patogeno nel campione fosse così piccola che il test non è stato in grado di rilevarla.. In questi casi, si dice che il livello di concentrazione è inferiore alla soglia di sensibilità del test.

Tale test può anche essere falso positivo o falso negativo, a causa della contaminazione del biomateriale o della presenza nei campioni di sostanze specifiche che reagiscono con i componenti chimici necessari per l'analisi.

Va sottolineato che nelle fasi acute dell'epatite C, uno studio qualitativo che utilizza il metodo PCR può rilevare il suo RNA dopo 1-2 settimane dal momento dell'infezione dell'organismo. Ciò significa che la malattia può essere rilevata molto prima della comparsa dei suoi sintomi esterni o della comparsa di anticorpi contro l'epatite nel corpo.

Il prelievo di sangue (da una vena) viene preferibilmente eseguito a stomaco vuoto.

Analisi quantitativa PCR

Utilizzando questa analisi, determinare il livello di concentrazione del virus dell'epatite nel paziente (carica virale). Tale test deve essere passato per stimare la quantità di virus RNA per unità di un certo volume.

Decifrare i test per l'epatite C, eseguiti secondo questo metodo, può avere i seguenti risultati:

  • Indicatore quantitativo (in cifre)

La concentrazione del virus (quantità) è data in termini numerici. Per questo vengono utilizzate diverse unità di misura: IU / ml (unità internazionale per millilitro) o copie / ml (il numero di copie dell'RNA del virus per millilitro). In media, 1 IU / ml corrisponde a 4 copie / ml, poiché i diversi sistemi di test hanno fattori di conversione diversi per tali unità.

I bassi valori di carica virale sono considerati inferiori a 400.000 IU / ml e 8.000.000 IU / ml sono alti.

Tale valutazione quantitativa consente di determinare il livello di infettività della malattia ("infettività") del paziente. Più questo indicatore di analisi è elevato, maggiore è la probabilità del rischio di trasmissione del patogeno ad altre persone (attraverso il contatto sessuale o verticalmente).

Questo verdetto significa che il metodo quantitativo non è in grado di rilevare l'RNA dell'epatite, ma il virus stesso è presente nel corpo, solo in concentrazioni molto basse. Ciò è stato confermato da ulteriori analisi qualitative della PCR, e dal suo risultato positivo testimonia il fatto della presenza di epatite.

  • Risultato non rilevato

    Questa interpretazione positiva dell'analisi suggerisce che il test quantitativo stesso in un campione di sangue non è in grado di rilevare particelle RNA specifiche del virus dell'epatite C.

  • Un'analisi quantitativa della PCR eseguita in diversi periodi di terapia antivirale (1a, 4a, 12a e 24a settimana) ci consente di giudicare l'efficacia del trattamento e apportare le modifiche necessarie.

    Specificità di analisi

    Questo test deve essere passato per determinare i diversi genotipi di epatite C. Attualmente, ci sono 11 genotipi di questo agente patogeno e molti sottotipi. Nel nostro paese, i genotipi di epatite C della 1a, 2a e 3a specie sono comuni. Nei laboratori possono identificare vari sottotipi di queste specie: 1a, 1b, 2a, 2b, o 3, 4, 5, 6 genotipi con varie modifiche dei sottotipi. Per tutte queste epatiti, la specificità della determinazione è del 100%.

    Specificando la modifica del genotipo è possibile selezionare il trattamento appropriato. La presenza di un particolare tipo di genotipo in un paziente non indica che la malattia sia più facile o più complicata, sono solo varietà del virus dell'epatite e non di più.

    In quei casi in cui il genotipo del virus non può essere isolato in laboratorio, si può dare il risultato: "Non digitato. Sono stati studiati genotipi: tali e così "(ad esempio, 1a, 2c, 3av). Questa decodifica suggerisce che in questo laboratorio non c'erano reagenti appropriati che potevano determinare il genotipo del virus dell'epatite. Lo studio è stato testato per i virus, i dati nella lista, ma la loro conformità con i campioni di RNA non sono stati identificati.

    Per fare una diagnosi definitiva, solo un tipo di analisi è insufficiente. Ciascuno dei test può dare un risultato falso positivo. Per determinare con precisione il tipo di epatite e l'entità del danno a questa infezione del corpo, condurre uno studio completo. Questo viene fatto con una biopsia epatica e testando i suoi enzimi: ALT, ASAT, così come fosfatasi alcalina e LDH. È possibile eseguire anche un test della bilirubina e l'analisi dell'indice di protrombina.

    Solo una serie di tali test e test di laboratorio, con un'analisi generale delle condizioni del paziente, aiuterà a determinare la presenza di epatite nel corpo, la sua forma e la gravità. Sulla base, il medico può determinare ulteriori trattamenti e fare una possibile prognosi per il paziente.

    Studio PCR per l'epatite C: tipi, indicazioni, trascrizione

    L'epatite C virale è una malattia grave che si verifica con danni al fegato. Nell'otto percento dei pazienti, diventa cronico. Il virus si moltiplica nelle cellule del fegato - gli epatociti - e causa la loro morte. Il tessuto morto viene sostituito da focolai di tessuto connettivo, si sviluppa la fibrosi.

    Con lo sviluppo della fibrosi epatica è in grado di svolgere la sua funzione, inizia la cirrosi, che è pericoloso per le sue complicanze: aumento della pressione nella vena porta, sanguinamento gastrointestinale, alterata coagulazione del sangue, alterazioni dello stato mentale a causa di danni cerebrali nuclei prodotti tossici.

    La causa della malattia è l'infezione da parte di un virus della famiglia Flaviviridae, che appartiene al tipo di virus a RNA. Ciò significa che il materiale genetico mediante il quale le proteine ​​del patogeno sono sintetizzate è codificato nella molecola di acido ribonucleico. L'infezione avviene attraverso il sangue, sessualmente, e da una donna incinta al feto. Sfortunatamente, una quantità sufficiente di tempo può passare tra l'infezione e l'inizio della produzione di anticorpi - da due settimane a sei mesi. Ciò non consente di determinare l'infezione con il metodo di immunodosaggio e iniziare il trattamento nelle prime fasi.

    Cos'è l'analisi PCR?

    La PCR è un metodo di analisi molecolare, che consente di rilevare il materiale genetico del patogeno già nella prima settimana dopo l'infezione utilizzando la reazione a catena della polimerasi. Lo studio ha un'elevata specificità, accuratezza e consente non solo di determinare la presenza o l'assenza del virus, ma anche la sua concentrazione e il genotipo.

    Per lo studio, viene prelevato il sangue di un paziente in cui l'RNA del virus può potenzialmente essere localizzato. I primer vengono aggiunti al sangue - regioni artificialmente sintetizzate del gene desiderato di piccola lunghezza, e l'RNA polimerasi è un enzima speciale che aumenta ripetutamente la quantità di materiale genetico del patogeno. Utilizzando un apparecchio speciale, vengono eseguiti diversi cicli di riscaldamento e raffreddamento. Quindi il materiale viene analizzato e confrontato con i geni noti del virus, sulla base dei quali viene formulata una conclusione sulla presenza o assenza di infezione.

    Tipi di analisi PCR per l'epatite C

    Esistono tre tipi di analisi PCR:

    1. Analisi qualitativa della PCR. La prima fase dello studio. Ti permette di identificare il materiale genetico del virus nel sangue.

  • Analisi quantitativa della PCR. Consente di determinare la carica virale - la concentrazione del materiale genetico del patogeno in un millilitro di sangue. Questo studio viene condotto prima dell'inizio della terapia, e poi nella prima, quarta, dodicesima e (se il corso è lungo) ventiquattr'ore della settimana di trattamento per valutare la sua efficacia.

  • Genotipizzazione. L'agente eziologico dell'epatite C si modifica spesso e rapidamente. C'erano sette varianti di questo genotipo di virus trovato sul pianeta. In Russia, il primo, il secondo e il terzo tipo sono comuni. Ciascuno dei genotipi ha una diversa resistenza alla terapia, per esempio, l'efficacia del trattamento del primo tipo è del sessanta per cento, e per il secondo e il terzo questa cifra raggiunge ottantacinque. Pertanto, al fine di selezionare i farmaci appropriati e prescrivere un ciclo di trattamento di durata sufficiente, è necessario determinare esattamente quale tipo di virus è stato infettato dal paziente.
  • Indicazioni per l'analisi PCR per l'epatite C

    Lo studio PCR è prescritto nei seguenti casi:

    • contatto con una persona malata in cui potrebbe verificarsi l'infezione;
    • saggio immunoenzimatico positivo;
    • segni di cirrosi: cambiamenti delle dimensioni del fegato, ingrossamento della milza, comparsa sull'addome del plesso venoso sottocutaneo;
    • la comparsa di sintomi di danno epatico: dolore all'addome destro, ingiallimento della pelle;
    • aumento dell'attività di ALT e AST nell'analisi biochimica del sangue;
    • prima di iniziare il trattamento per determinare la carica virale;
    • monitorare l'efficacia della terapia antivirale;
    • dopo il trattamento per controllare la ricaduta;
    • in presenza di diagnosi di epatite B, per escludere un danno epatico misto.

    Spiegazione degli studi PCR sull'epatite C

    La decodifica dell'analisi PCR e del saggio immunologico enzimatico per l'epatite C dovrebbe essere eseguita da un epatologo o da uno specialista in malattie infettive. L'analisi dei risultati della PCR è necessaria in combinazione con i dati dell'analisi biochimica del sangue, della biopsia e degli ultrasuoni. Solo un medico qualificato sarà in grado di analizzare i risultati della ricerca e, sulla base di essi, prescriverà il trattamento corretto.

    Decodifica analisi qualitativa.

    Nel materiale biologico analizzato trovato il materiale genetico del patogeno. Infezione confermata

    L'infezione è assente o la quantità di RNA dell'agente patogeno è inferiore al limite di sensibilità.

    Decodifica dell'analisi quantitativa.

    Tasso normale per persone sane. Significa che non vi è alcun RNA di epatite C nel materiale in studio, o la sua concentrazione è inferiore alla soglia di sensibilità dello studio.

    La concentrazione di RNA è inferiore all'intervallo di quantificazione. Questi risultati sono interpretati molto attentamente, li correlano con i dati di altri studi, spesso riesaminano.

    Il livello di carica virale a una determinata concentrazione è considerato basso. Di solito, una diminuzione della quantità di virus significa che la terapia ha successo.

    Più di 8 * 10 ^ 5 IU / ml

    Il livello di carica virale a una data concentrazione è considerato alto.

    Più di 2,4 * 10 ^ 7 IU / ml

    La quantità di RNA è superiore al limite superiore dell'intervallo di quantificazione. È impossibile trarre conclusioni sul grado di carica virale con questo risultato. Solitamente in tali casi, il test viene ripetuto con la diluizione di un campione di sangue.

    Genotipizzazione decodifica

    RNA rilevato di un genotipo specifico

    Il virus dell'epatite C di un determinato genotipo e sottotipo è stato rilevato nel biomateriale. Il risultato è codificato in numeri romani e lettere latine, ad esempio - 1a, 2b. In totale ci sono sette genotipi e sessantasette sottotipi, tuttavia, in Russia ci sono solo tre primi tipi.

    Rilevato RNA del virus dell'epatite C

    L'RNA è stato trovato nel sangue di un raro genotipo per la Russia, che non può essere attribuito al primo, al secondo o al terzo tipo. Sono necessarie ulteriori ricerche

    Questo risultato indica che il paziente è sano o che la quantità di RNA patogeno è troppo piccola.

    È possibile che l'analisi PCR per l'epatite C sia negativa e il saggio immunoassorbente legato all'enzima riconosca gli anticorpi contro il virus. Ciò significa che il paziente ha avuto un'epatite C acuta e si è ripreso da solo. Circa venti casi di infezione provocano un recupero spontaneo se il corpo del paziente ha una resistenza sufficiente all'infezione.

    Sebbene la PCR sia un dosaggio estremamente accurato, i suoi risultati potrebbero essere distorti nelle seguenti situazioni:

    • il sangue è stato trasportato in laboratorio in condizioni inadeguate, la temperatura è stata violata;
    • il campione di biomateriale era contaminato;
    • c'erano tracce residue di eparina e altri anticoagulanti nel sangue;
    • Gli investigatori sono risultati essere inibitori - sostanze che rallentano o fermano la reazione a catena della polimerasi.

    I vantaggi della PCR rispetto ad altri metodi

    1. Diagnosi nelle prime fasi. PCR rileva il materiale genetico dell'agente causale. Utilizzando l'analisi di immunofluorescenza, possono essere determinate solo le immunoglobuline - sostanze che il corpo produce in risposta a un'infezione. In caso di infezione da epatite C, l'intervallo tra l'infezione e l'insorgenza della risposta immunitaria può essere di diverse settimane e mesi, in questo momento l'ELISA sarà inefficace. La PCR darà una risposta nella prima settimana dopo l'infezione.

  • Bassa probabilità di errore. Nel materiale in esame determinare l'area del materiale genetico, che è caratteristico di un solo tipo di agenti patogeni. Questo elimina risultati falsi. Quando sono possibili errori ELISA, poiché lo stesso tipo di anticorpi può essere rilasciato contro diversi virus - tali anticorpi sono chiamati anticorpi.

  • Alta sensibilità La PCR consente di rilevare l'RNA dell'agente causativo anche in quantità minime. Questo rende possibile identificare le infezioni nascoste.
  • Come prepararsi per la donazione di sangue per gli studi sulla PCR

    Per l'analisi PCR dell'epatite C, viene raccolto sangue venoso. Di solito, due porzioni di sangue vengono prelevate dalla vena del paziente alla volta: la prima viene inviata per la PCR e la seconda da ELISA. Questo viene fatto al fine di valutare più accuratamente quanto un paziente è stato infettato da un virus e in che modo l'immunità combatte contro di esso.

    Di solito il paziente è tenuto ad aderire alle seguenti regole:

    • un esame del sangue viene effettuato al mattino;
    • L'intervallo tra l'ultimo pasto e la donazione di sangue dovrebbe essere da otto a dieci ore;
    • due o tre giorni prima dell'analisi, è necessario abbandonare cibi fritti e grassi e alcol;
    • per ventiquattro ore prima dell'analisi, il paziente dovrebbe evitare lo sforzo fisico: non portare pesi, non andare in palestra o in piscina.

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